THP-1细胞是从别称患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血均分离得到的东谈主单核细胞白血病细胞，具有悬浮滋长并变成松散团块的特质撸撸侠，倍增时辰约为60-70小时。该细胞系被庸碌用于单核细胞和巨噬细胞关系的机制、信号通路以及养分和药物运载等考虑，是考虑免疫和炎症的渴望器具，省略被调换分化为巨噬细胞M1和M2，并开释相应的细胞因子。

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案例一、基于CRISPR/Cas9本事构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株的考虑

该考虑旨在继承CRISPR/Cas9本事构建吲哚胺-2，3-双加氧酶1（IDO1）基因敲除的THP-1细胞株，播色网为考虑IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模子。

考虑者遐想了靶向IDO1基因的3条向导RNA（gRNA），构建了IDO1-gRNA重组质粒，并通过酶切及测序决然后包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒。专揽Cas9慢病毒感染THP-1细胞赢得踏实抒发Cas9卵白的细胞株，再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因，有限稀释法赢得单克隆细胞株。通过T7E1酶切检测gRNA打靶服从，PCR居品测序和Western blot决然IDO1基因敲除甘休。收效构建了3种IDO1-gRNA重组质粒，并赢得了3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株。考虑发现，IDO1基因敲除可扼制THP-1细胞增殖，下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68抒发，上调CD14抒发，并增强THP-1巨噬细胞并吞功能。

该考虑收效构建了IDO1基因敲除的THP-1细胞株，并揭示了IDO1对THP-1细胞增殖活性、分化调度以及巨噬细胞并吞功能调度的焦炙作用，为后续进一步接头IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制考虑奠定了基础。

案例二、GLP-1R基因敲除的THP-1细胞系成就格外功能考虑

巨噬细胞具有高度异质性和可塑性，在不同系统中不同的疾病或合并疾病的不同阶段，巨噬细胞不错发生表型变化，从而捏行不同的功能。胰高血糖素样肽-1（GLP-1）在调控巨噬细胞迁徙及表型分化等方面推崇着一定作用。

该考虑旨在通过Cas9慢病毒介导的要领构建GLP-1R基因踏实敲除的THP-1细胞系，探究GLP-1R抒发对巨噬细胞迁徙和极化的影响。考虑者构建了针对GLP-1R基因的特异性打靶慢病毒载体，成就了GLP-1R-/-THP-1细胞系，并使用嘌呤霉素进行筛选。通过基因测序和卵白思绪履行（Western blot）进行决然后，鉴识用佛波酯（PMA）、干预素γ（INF-γ）+脂多糖（LPS）、白介素4（IL-4）刺激野生型组（WT组）和GLP-1R-/-组（KO组），进一步构建WT组和KO组的M0、M1、M2型巨噬细胞模子。专揽流式细胞术检测细胞名义分子的抒发，qRT-PCR检测关系mRNA的抒发，以及Transwell和划痕履行检测GLP-1R对巨噬细胞的迁徙情况。基因测序及Western blot甘休阐明GLP-1R-/-THP-1细胞系构建收效。流式细胞术甘休表现，M0型巨噬细胞高抒发CD14+，M1型高抒发CD14+CD80+，M2型高抒发CD14+CD206+。qRT-PCR甘休表现，与WT组比较，KO组调换得到的巨噬细胞中M1型巨噬细胞秀雅物mRNA抒发彰着升高，M2型巨噬细胞秀雅物mRNA抒发权贵裁汰。此外，GLP-1R省略影响巨噬细胞的迁徙。

该考虑收效构建了一株GLP-1R基因敲除的THP-1细胞系，并通过对不同细胞系的调换分化考虑得出GLP-1R基因枯竭可调换巨噬细胞分泌促炎因子，向M1型巨噬细胞极化；而GLP-1R则可促使巨噬细胞分泌抗炎因子，向M2型巨噬细胞极化。这一发现为长远了解GLP-1在巨噬细胞功能调度中的作用提供了新的视角。

说七说八，基因敲除THP-1在文件中的代表性考虑进展体当今多个方面，包括构建特定基因的敲除模子、揭示基因在巨噬细胞中的作用机制以及为疾病诊治和药物筛选提供新的念念路和要领等。

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